بافر بارگذاری ژل (Gel Loading Buffer) برای الکتروفورز اسیدهای نوکلئیک | کد G2526

بافر بارگذاری ژل (Gel Loading Buffer) سیگما آلدریچ – کد G2526

۶X DNA Loading Buffer for Nucleic Acid Electrophoresis

معرفی محصول

بافر بارگذاری ژل (Gel Loading Buffer) از برند Sigma-Aldrich یکی از مواد پایه در آزمایش‌های الکتروفورز DNA و RNA است. این محلول به عنوان رنگ ردیاب (Tracking Dye) در فرآیند الکتروفورز عمل می‌کند و به محقق امکان می‌دهد حرکت مولکول‌های اسید نوکلئیک را در طول ژل به‌صورت بصری دنبال کند.
این بافر دارای بار منفی ضعیف است و در همان جهت DNA در ژل حرکت می‌کند، به همین دلیل می‌توان روند مهاجرت نمونه‌ها را به‌راحتی پایش کرد.
سرعت حرکت رنگ در ژل به ترکیب و غلظت ژل بستگی دارد. پیش از بارگذاری، محلول باید به نسبت ۱ به ۳ تا ۱ به ۶ با نمونه رقیق شود.

کاربرد (Application)

Gel Loading Buffer در طیف وسیعی از کاربردهای مولکولی استفاده می‌شود، از جمله:

• بارگذاری محصولات PCR شامل ناحیه بین‌ژنی (Intergenic Spacer Region – ISR)

• بارگذاری نمونه‌های DNA استخراج‌شده از بافت‌های روده‌ای (intestinal mucosa)

• استفاده برای DNA گونه‌های Trypanosoma sp. در ژل آگارز جهت الکتروفورز

این بافر برای استفاده در الکتروفورز ژل آگارز (Agarose Gel Electrophoresis) و همچنین الکتروفورز پلی‌اکریل‌آمید  non-denaturing مناسب است، و در فرآیندهای بلات هیبریداسیون Northern و Southern نیز کاربرد دارد.

ویژگی‌های بیوشیمیایی و فیزیولوژیک (Biochem/physiol Actions)

این محلول به‌طور ویژه برای الکتروفورز  non-denaturing پلی‌اکریل‌آمید و آگارز ژل طراحی شده است تا شرایط بهینه‌ای برای مهاجرت DNA و RNA فراهم کند.
بافر بارگذاری ژل سیگما آلدریچ حاوی رنگ ردیاب بروموفنول بلو (Bromophenol Blue) و ساکارز (Sucrose) است که به افزایش چگالی نمونه و تسهیل ورود آن به چاهک‌های ژل کمک می‌کند.
علاوه بر این، وجود EDTA در ترکیب، از فعالیت نوکلئازهایی که به یون‌های دوظرفیتی نیاز دارند جلوگیری کرده و از تخریب DNA و RNA پیشگیری می‌کند.
همچنین SDS به منظور جدا کردن کمپلکس‌های DNA-پروتئین افزوده شده است تا از تداخل آن‌ها در روند مهاجرت مولکولی جلوگیری شود.

ترکیب شیمیایی (Preparation Note)

ترکیب محلول Gel Loading Buffer شامل موارد زیر است:

• ۰٫۰۵% Bromophenol Blue

• ۴۰% Sucrose

• ۰٫۱ M EDTA (pH 8.0)

• ۰٫۵% SDS

این ترکیب باعث افزایش پایداری نمونه، وضوح باندهای DNA و یکنواختی مهاجرت مولکول‌ها در ژل می‌شود.

نحوه استفاده

پیش از بارگذاری بر روی ژل، محلول را به نسبت ۱ قسمت بافر به ۵ قسمت نمونه (۱:۵) مخلوط کنید. سپس مقدار مناسب از نمونه را در چاهک‌های ژل آگارز یا PAGE تزریق کنید. این بافر برای کار با نمونه‌های DNA، RNA و محصولات PCR کاملاً سازگار است.

ویژگی‌ها و مزایا

• آماده مصرف، با غلظت ۶X

• قابل استفاده در Agarose Gel و PAGE

• حاوی رنگ‌های ردیاب برای مشاهده پیشرفت الکتروفورز

• جلوگیری از تخریب نمونه به‌وسیله EDTA

• تسهیل بارگذاری دقیق نمونه به‌دلیل وجود ساکارز

لینک‌های مفید